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微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù).ppt

上傳人:good****022 文檔編號(hào):120777961 上傳時(shí)間:2022-07-18 格式:PPT 頁(yè)數(shù):77 大?。?.52MB
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1、微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù),第一章,實(shí)驗(yàn)室建設(shè)及設(shè)備儀器,實(shí)驗(yàn)室建設(shè)及設(shè)備儀器,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè) 1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制 1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng) 1.4 常用器皿 1.5 型微生物廠主要儀器及設(shè)備,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),1.1.1 微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì) 微生物實(shí)驗(yàn)室由準(zhǔn)備室、洗滌室、滅菌室、無(wú)菌室、恒溫培養(yǎng)室和普通實(shí)驗(yàn)室六部分組成。這些房間的共同特點(diǎn)是地板和墻壁的質(zhì)地光滑堅(jiān)硬,儀器和設(shè)備的陳設(shè)簡(jiǎn)潔,便于打掃衛(wèi)生。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),1.1.2 微生物實(shí)驗(yàn)室基本要求 (一)準(zhǔn)備室 準(zhǔn)備室用于配制培養(yǎng)基和樣品處理等。室內(nèi)設(shè)有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、電爐、冰箱和上下水道、電源等。 (二)洗滌室

2、洗滌室用于洗刷器皿等。由于使用過(guò)的器皿已被微生物污染,有時(shí)還會(huì)存在病原微生物。因此,在條件允許的情況下,最好設(shè)置洗滌室。室內(nèi)應(yīng)備有加熱器、蒸鍋,洗刷器皿用的盆、桶等,還應(yīng)有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),(三)滅菌室 滅菌室主要用于培養(yǎng)基的滅菌和各種器具的滅菌,室內(nèi)應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設(shè)備及設(shè)施。 (四)無(wú)菌室 無(wú)菌室也稱接種室,是系統(tǒng)接種、純化菌種等無(wú)菌操作的專用實(shí)驗(yàn)室。在微生物工作中,菌種的接種移植是一項(xiàng)主要操作,這項(xiàng)操作的特點(diǎn)就是要保證菌種純種,防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,很易造成污染,對(duì)接種工作干擾很大。,1.1 實(shí)驗(yàn)

3、室建設(shè),1. 無(wú)菌室的設(shè)置 無(wú)菌室應(yīng)根據(jù)既經(jīng)濟(jì)又科學(xué)的原則來(lái)設(shè)置。其基本要求有以下幾點(diǎn): (1)無(wú)菌室應(yīng)有內(nèi)、外兩間,內(nèi)間是無(wú)菌室,外間是緩沖室。房間容積不宜過(guò)大,以便于空氣滅菌。內(nèi)間面積22.55m2,外間面積122m2,高以2.5m以下為宜,都應(yīng)有天花板。 (2)內(nèi)間應(yīng)當(dāng)設(shè)拉門,以減少空氣的波動(dòng),門應(yīng)設(shè)在離工作臺(tái)最遠(yuǎn)的位置上;外間的門最好也用拉門,要設(shè)在距內(nèi)間最遠(yuǎn)的位置上。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),(3)在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上,應(yīng)開一個(gè)小窗,作接種過(guò)程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道,以減少人員進(jìn)出內(nèi)間的次數(shù),降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm,內(nèi)外都掛對(duì)拉的窗扇。 (

4、4)無(wú)菌室容積小而嚴(yán)密,使用一段時(shí)間后,室內(nèi)溫度很高,故應(yīng)設(shè)置通氣窗。通氣窗應(yīng)設(shè)在內(nèi)室進(jìn)門處的頂棚上(即離工作臺(tái)最遠(yuǎn)的位置),最好為雙層結(jié)構(gòu),外層為百葉窗,內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開啟,以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機(jī)。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),2. 無(wú)菌室內(nèi)設(shè)備和用具 (1)無(wú)菌室內(nèi)的工作臺(tái),不論是什么材質(zhì)、用途的,都要求表面光滑和臺(tái)面水平。 (2)在內(nèi)室和外室各安裝一個(gè)紫外燈(多為30W)。內(nèi)室的紫外線燈應(yīng)安裝在經(jīng)常工作的座位正上方,離地面2m,外室的紫外線燈可安裝在外室中央。 (3)外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來(lái)蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸

5、溶液等。 (4)內(nèi)室應(yīng)有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標(biāo)簽紙、膠水、廢物筐等。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),3. 無(wú)菌室的滅菌消毒 (1)薰蒸:這是無(wú)菌室徹底滅菌的措施。無(wú)菌室使用了較長(zhǎng)時(shí)間,污染比較嚴(yán)重時(shí),應(yīng)進(jìn)行薰蒸滅菌??捎眉兹?、乳酸或硫磺薰蒸。 (2)噴霧:在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微塵飛場(chǎng),并有殺菌作用。可用5%石炭酸噴霧。 (3)紫外線照射:在每次使用無(wú)菌室前進(jìn)行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應(yīng)開啟紫外線燈照射3060min。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),4. 無(wú)菌室工作規(guī)

6、程 (1)無(wú)菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上,或在使用前30min,對(duì)內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。 (2)用肥皂洗手后,把所需器材搬入外室;在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋,戴好口罩,然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。 (3)將各種需用物品搬進(jìn)內(nèi)室清點(diǎn)、就位,用5%石炭酸在工作臺(tái)面上方和操作員站位空間噴霧,返回外室,510min后再進(jìn)內(nèi)室工作。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),(4)接種操作前,用70%酒精棉球擦手;進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí),動(dòng)作要輕緩,盡量減少空氣波動(dòng)和地面揚(yáng)塵。 (5)工作中應(yīng)注意安全。如遇棉塞著火,用手緊握或用濕布包裹熄滅,切勿用嘴吹,以免擴(kuò)大燃燒;如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打

7、碎有菌容器時(shí),應(yīng)用浸潤(rùn)5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸潤(rùn)5%石炭酸的抹布擦拭臺(tái)面或地面,用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。 (6)工作結(jié)束,立即將臺(tái)面收拾干凈,將不應(yīng)在無(wú)菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無(wú)菌室后,對(duì)無(wú)菌室用5%石炭酸噴霧,或開紫外線燈照射30min。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),(五)恒溫培養(yǎng)室 1. 培養(yǎng)室的設(shè)置 (1)培養(yǎng)室應(yīng)有內(nèi)、外兩間,內(nèi)室是培養(yǎng)室,外室是緩沖室。房間容積不宜大,以利于空氣滅菌,內(nèi)室面積在3.24.414m2左右,外室面積在3.21.86m2左右,高以2.5m左右為宜,都應(yīng)有天花板。 (2)分隔內(nèi)室與外室的墻壁上部應(yīng)設(shè)帶空氣過(guò)濾裝置的通風(fēng)口。 (3)為滿足微生物對(duì)溫度的需

8、要,需安裝恒溫恒濕機(jī)。 (4)內(nèi)外室都應(yīng)在室中央安裝紫外線燈,以供滅菌用。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),2. 培養(yǎng)室內(nèi)設(shè)備及用具 (1)內(nèi)室通常配備培養(yǎng)架和搖瓶機(jī)(搖床)。常用的搖瓶機(jī)有旋轉(zhuǎn)式、往復(fù)式兩種。 (2)外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、手持噴霧器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。 3. 培養(yǎng)室的滅菌、消毒 同無(wú)菌室的滅菌、消毒措施。 小規(guī)模的培養(yǎng)可不啟用恒溫培養(yǎng)室,而在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。,1.1 實(shí)驗(yàn)室建設(shè),(六)普通實(shí)驗(yàn)室 進(jìn)行微生物的觀察、計(jì)數(shù)和生理生化測(cè)定工作的場(chǎng)所。室內(nèi)的陳設(shè)因工作側(cè)重點(diǎn)不同而有很大的差異。一般均配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、顯微鏡、柜子及凳子。實(shí)驗(yàn)臺(tái)要求平整、光滑,實(shí)驗(yàn)柜要足以

9、容納日常使用的用具及藥品等。 (七)實(shí)驗(yàn)室其他要求 水、電、氣等的容量、布設(shè)、性能均應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)室工作的需要。,返回,1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制,1.2.1 檢驗(yàn)的方法 (一)平板檢驗(yàn)法 用培養(yǎng)微生物主要類群的常規(guī)培養(yǎng)基,如牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏1號(hào)培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基,分別倒成平板,每種兩個(gè),都放入無(wú)菌室內(nèi)。檢驗(yàn)時(shí),按無(wú)菌操作各將其中一個(gè)平板的蓋子打開,經(jīng)過(guò)預(yù)定時(shí)間后再行蓋好;另外一個(gè)不開蓋子的作為對(duì)照,一起放入30環(huán)境培養(yǎng),48小時(shí)后檢驗(yàn)有無(wú)菌落生長(zhǎng)。,1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制,(二)斜面檢驗(yàn)法 將常用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面(與上相同)各取2管,放入無(wú)菌室。按無(wú)菌操作各將其

10、中的一管打開棉塞,將棉塞放入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)。經(jīng)過(guò)預(yù)定時(shí)間后,再將棉塞通過(guò)火焰塞好試管。連同對(duì)照一起培養(yǎng),48小時(shí)后檢驗(yàn)有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。,1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制,1.2.2 檢驗(yàn)時(shí)間 (一)空氣滅菌后的檢驗(yàn) 無(wú)菌室用甲醛或其它藥劑熏蒸后,在開始使用前30min或1小時(shí)打開培養(yǎng)皿蓋子,至使用無(wú)菌室時(shí)蓋好,其目的是為了檢驗(yàn)無(wú)菌室內(nèi)空氣滅菌的效果。 (二)紫外線滅菌效果的檢驗(yàn) 無(wú)菌室用紫外線燈照射后,可在不同高度和不同位置用瓊脂平板檢驗(yàn)空氣中的雜菌,以判斷紫外線的滅菌效果。必要時(shí)應(yīng)調(diào)整照射時(shí)間或紫外線燈的高度。,1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制,(三)操作過(guò)程中空氣污染情況的檢驗(yàn) 為了檢驗(yàn)在使用無(wú)菌室的過(guò)程中,由于人

11、員的進(jìn)出、器材的搬放、接種操作的動(dòng)作等原因造成的空氣污染的情況,可在準(zhǔn)備工作結(jié)束后接種操作開始時(shí)打開蓋子,經(jīng)5min、30min或直到工作結(jié)束時(shí)再蓋好,以檢驗(yàn)在不同的使用時(shí)間內(nèi)空氣污染的程度。,1.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制,1.2.3 檢驗(yàn)結(jié)果分析 檢驗(yàn)用的平板或斜面,在30培養(yǎng)48小時(shí)后,檢驗(yàn)是否長(zhǎng)有菌落、菌落的數(shù)量,并由菌落形態(tài)判斷雜菌的種類。一般要求平板開蓋5min者應(yīng)不超過(guò)3個(gè)菌落;斜面開塞30min者應(yīng)不長(zhǎng)菌落為合格。從空氣中雜菌的種類可以考慮采取有效措施,增進(jìn)滅菌效果。如霉菌較多,可先用5%石炭酸滅菌后,再用甲醛熏蒸;如細(xì)菌較多時(shí),可采用乳酸與甲醛交替熏蒸的辦法。,返回,1.3 常用儀器及

12、其使用要領(lǐng),1.3.1 顯微鏡 (一)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 普通光學(xué)顯微鏡由機(jī)械和光學(xué)兩大部分組成。機(jī)械部分包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒和調(diào)節(jié)器等;光學(xué)部分包括目鏡、物鏡、聚光器、虹彩光圈及反光鏡。顯微鏡結(jié)構(gòu)的各部分見圖1-1。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-1 顯微鏡構(gòu)造示意圖,1.物鏡轉(zhuǎn)換器;2.物鏡;3.游標(biāo)卡尺;4.載物臺(tái);5.聚光器;6.虹彩光圈 7.光源;8.鏡座;9.點(diǎn)源開關(guān);10.光源滑動(dòng)變阻器;11.粗調(diào)螺旋; 12.微調(diào)螺旋;13.鏡臂;14.鏡筒;15.目鏡;16.標(biāo)本移動(dòng)螺旋,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1. 鏡筒 鏡筒上端裝目鏡,下端接轉(zhuǎn)換器。鏡筒有單

13、筒和雙筒兩種。單筒有直立式和后傾式兩種。雙筒全是傾斜式的,其中一個(gè)筒有屈光度調(diào)節(jié)裝置,以備兩眼視力不同者調(diào)節(jié)使用。兩筒之間可調(diào)距離,以適應(yīng)兩眼寬度不同者調(diào)節(jié)使用。 2. 物鏡轉(zhuǎn)換器 轉(zhuǎn)換器裝在鏡筒的下方,其上有3個(gè)孔,有的有4個(gè)或5個(gè)孔,用于安裝不同規(guī)格的物鏡。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3. 載物臺(tái) 又稱鏡臺(tái),是放置標(biāo)本的地方,多數(shù)為方形和圓形的平臺(tái),中央有一通光孔;載物臺(tái)上有移動(dòng)器,作用是夾住和移動(dòng)標(biāo)本,轉(zhuǎn)動(dòng)螺旋可使標(biāo)本前后和左右移動(dòng),其上的刻度標(biāo)尺可指明標(biāo)本所在位置。 4. 鏡臂 鏡臂支撐鏡筒、載物臺(tái)、聚光器和調(diào)節(jié)器。鏡臂有固定式和活動(dòng)式(可改變傾斜度)兩種。,1.3 常用儀器及其使

14、用要領(lǐng),5. 鏡座 鏡座連接鏡臂,支撐整臺(tái)顯微鏡,其上有反光鏡。 6. 調(diào)焦裝置 調(diào)節(jié)物鏡和被觀察物體之間距離的機(jī)件。有鏡臂調(diào)節(jié)器和鏡臺(tái)調(diào)節(jié)器兩種,前者通過(guò)升降鏡臂來(lái)調(diào)焦距,后者通過(guò)升降載物臺(tái)來(lái)調(diào)焦距。包括大、小螺旋調(diào)節(jié)器各一個(gè),前者又稱粗調(diào)節(jié)器,后者也叫微調(diào)節(jié)器,通過(guò)調(diào)節(jié)器調(diào)焦,可清晰地觀察到標(biāo)本。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),7. 物鏡 是接近被觀察物品(標(biāo)本)的鏡頭,亦稱接物鏡。根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)和使用方法的不同,分為低倍物鏡、高倍物鏡和油鏡三種,低倍物鏡有4、10、20;高倍物鏡有40和45;油鏡有90、95和100等。數(shù)字越大,放大倍數(shù)越高。 8. 目鏡 是接近觀察者的眼睛的鏡頭,

15、亦稱接目鏡。把經(jīng)物鏡放大的實(shí)像再放大一次,并映入觀察者的眼中。通常有5、10、16等規(guī)格。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),9. 聚光器 安裝在載物臺(tái)下,能將平行的光線聚焦于標(biāo)本,增強(qiáng)照明度。聚光器可以升降。 10. 反光鏡 是普通光學(xué)顯微鏡的取光設(shè)備,使光線射向聚光鏡,分平、凹兩面。 11. 內(nèi)光源 是較好的光學(xué)顯微鏡自身帶有的照明裝置,安裝在鏡座內(nèi)部,由強(qiáng)光燈泡發(fā)出光線,通過(guò)安裝在鏡座的集光鏡射入聚光鏡。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),(二) 顯微鏡的使用方法 1. 顯微鏡的放置 從顯微鏡箱或柜內(nèi)取出或放入顯微鏡時(shí),應(yīng)一手提鏡臂,另一手托鏡座,讓顯微鏡直立,防止目鏡從鏡筒中脫落。顯微鏡應(yīng)直立

16、放置在桌上。離桌緣3cm,檢查各部件是否完好,鏡身、鏡頭必須清潔。 2 .標(biāo)本放置 下降載物臺(tái)或升高鏡筒,使物鏡遠(yuǎn)離載物臺(tái),將標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上,用標(biāo)本夾夾住,移動(dòng)推進(jìn)器使觀察對(duì)象處在物鏡的正下方。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3 .低倍鏡觀察 將低倍鏡對(duì)正下方,側(cè)面注視,用粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)上升載物臺(tái)或下降鏡筒,使物鏡與玻片接近,距離約0.5cm處,開放光圈,下降聚光器。如有內(nèi)置光源燈可通過(guò)調(diào)節(jié)電壓以獲取適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?;如使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時(shí),應(yīng)根據(jù)光源的強(qiáng)度及所用物鏡的放大倍數(shù),選用凹面或平面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度。 再由目鏡觀察,同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器下降載物臺(tái)或升高鏡筒使物鏡緩

17、緩遠(yuǎn)離玻片,標(biāo)本在視野中顯現(xiàn)后,再使用微調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)至圖像清晰。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),4 .高倍鏡觀察 在低倍鏡下找到合適的目標(biāo)并將其移至視野中心后,側(cè)面注視,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至正下方。對(duì)聚光器光圈及視野亮度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)后,用微調(diào)節(jié)器使物像清晰,利用推進(jìn)器移動(dòng)標(biāo)本仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。 在一般情況下,當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后,轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進(jìn)行觀察時(shí),物像將保持基本準(zhǔn)焦?fàn)顟B(tài),這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),5 .油鏡觀察 使用同焦顯微鏡時(shí),在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的區(qū)域后,移開鏡頭,在待觀察的區(qū)域滴加12鏡油,

18、將油鏡轉(zhuǎn)至油中,調(diào)節(jié)光強(qiáng),使視野的亮度合適,用微調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)物像清晰為止。 對(duì)于不等焦的顯微鏡,用粗調(diào)節(jié)器下降載物臺(tái)或升高鏡筒使物鏡逐漸遠(yuǎn)離玻片,在標(biāo)本觀察區(qū)滴加鏡油,然后將油鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方,須在側(cè)面注視下,用粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)上升載物臺(tái)或下降鏡筒,使物鏡與玻片接近,將油鏡前端浸入鏡油中,并幾乎與標(biāo)本相接,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),6 .顯微鏡用畢后的處理 用粗調(diào)節(jié)器使物鏡遠(yuǎn)離玻片,取下載玻片。 用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油,然后用擦鏡紙蘸少許鏡頭清洗液擦去鏡頭上殘留的油跡,最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的鏡頭清洗液。 切忌用手或其它紙擦拭鏡頭,以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕,影響觀察。 用擦鏡紙清潔其它

19、物鏡及目鏡;用綢布清潔顯微鏡的金屬部件。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),(三)顯微鏡的維護(hù)和保養(yǎng) 顯微鏡是貴重精密的光學(xué)儀器,正確的使用、維護(hù)與保養(yǎng),不但觀察物體清晰,而且延長(zhǎng)顯微鏡的使用壽命。 1 .顯微鏡應(yīng)放置在通風(fēng)干燥,灰塵少,不受陽(yáng)光直接曝曬的地方。不使用時(shí),用有機(jī)玻璃或塑料布防塵罩罩起來(lái)。也可套上布罩后放入顯微鏡箱內(nèi)或顯微鏡柜內(nèi),并在箱或柜內(nèi)放置干燥劑。 2 .顯微鏡要避免與酸、堿及易揮發(fā)具腐蝕性的化學(xué)物品放在一起,以免顯微鏡受損。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3 .顯微鏡應(yīng)防止震動(dòng)和暴力。粗、微調(diào)節(jié)螺旋、聚光器螺旋和標(biāo)本移動(dòng)器等機(jī)械部分要靈活而不松動(dòng),如不靈活可在滑動(dòng)部位滴加少許

20、潤(rùn)滑油。 4 .透鏡表面有污垢時(shí),可用清潔的脫脂紗布或擦鏡紙,沾上少許鏡頭清洗液(二甲苯或石油精)揩拭,切忌用酒精,否則透鏡上的膠將被溶解,而使透鏡脫落。 5 .用油鏡觀察后,先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油,然后用擦鏡紙沾少許鏡頭清洗液擦拭,最后用干凈的擦鏡紙擦干。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),6 .當(dāng)顯微鏡以燈泡為光源,且需要更換時(shí),可將儀器底部翻轉(zhuǎn),抓住燈座反時(shí)針轉(zhuǎn)90取下燈座,拔下燈泡換上新的燈泡,然后把接插件卡腳對(duì)準(zhǔn)底座上兩槽口,順時(shí)針轉(zhuǎn)90即可。 7.換保險(xiǎn)絲時(shí),握住保險(xiǎn)絲座,反時(shí)針旋下保險(xiǎn)絲座,換上好的保險(xiǎn)絲,順時(shí)針旋上保險(xiǎn)絲座即可。 8.儀器長(zhǎng)期使用后應(yīng)注意在各轉(zhuǎn)動(dòng)部分加些潤(rùn)滑脂,所

21、用油脂宜應(yīng)黏度適當(dāng),避免酸性。 9.顯微鏡結(jié)構(gòu)精密,零件不宜隨意拆卸。遇故障可送廠家或有關(guān)儀器廠修理。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.2 恒溫培養(yǎng)箱 恒溫培養(yǎng)箱可分為兩大類:即直熱式恒溫培養(yǎng)箱和隔水式恒溫培養(yǎng)箱。 (一)直熱式恒溫培養(yǎng)箱 為直接加熱空氣方式的培養(yǎng)箱,采用“繼電器控溫電加熱空氣”技術(shù),結(jié)構(gòu)為:保溫板材箱內(nèi)裝繼電器控溫電加熱器。這種培養(yǎng)箱造價(jià)低,制造工藝簡(jiǎn)單,但恒溫效果較差,溫度波動(dòng)大。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),(二)隔水式恒溫培養(yǎng)箱 為間接加熱空氣方式的培養(yǎng)箱,采用“繼電器控溫電加熱水控制空氣溫度”技術(shù),結(jié)構(gòu)為:簿鋼板外殼內(nèi)襯玻璃棉,內(nèi)置紫銅板水箱,水箱內(nèi)裝繼電器控

22、溫電加熱器,設(shè)雙層門。這種培養(yǎng)箱制造工藝復(fù)雜,造價(jià)高,但由于先用電加熱水層,再由水傳熱至箱內(nèi)空氣,因而溫度上升和下降緩慢,加之可通過(guò)雙層門的玻璃內(nèi)門觀察,對(duì)箱內(nèi)溫度影響小,故恒溫效果好,調(diào)溫為20600.5,很適于微生物培養(yǎng)之用。見圖1-2。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-2 培養(yǎng)箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用注意事項(xiàng): 1. 箱內(nèi)不應(yīng)放入過(guò)熱過(guò)冷的東西,以免箱內(nèi)溫度急劇變化,阻礙培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。 2. 箱內(nèi)應(yīng)放入水容器一只,以維持培養(yǎng)箱內(nèi)濕度或減少培養(yǎng)物中水分的大量蒸發(fā)。 3. 培養(yǎng)箱底部因接近電源,溫度較高,故培養(yǎng)物不宜放在底層。 4. 箱內(nèi)培養(yǎng)物不宜太擠,以免溫空氣不能流通,

23、而使箱內(nèi)溫度不勻。 5. 箱內(nèi)要保持清潔,并經(jīng)常用3%來(lái)蘇兒液消毒,再用清潔抹布擦凈。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.3 滅菌器 (一)干熱滅菌箱 滅菌箱正面的側(cè)邊,裝有溫度指針,用于定溫;溫度指針下面有指示燈,用于指示是否達(dá)到定溫;箱內(nèi)有感溫探頭,用于探測(cè)溫度。指針、指示燈、探頭、電加熱器均連接于“溫度調(diào)節(jié)器”,通過(guò)溫度調(diào)節(jié)器使箱內(nèi)保持一定溫度。如溫度未達(dá)定溫,電加熱器工作,箱內(nèi)溫度上升,如溫度超過(guò)定溫,“溫度調(diào)節(jié)器”自動(dòng)切斷電加熱器的電源,停止加熱,箱內(nèi)溫度即可下降。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-3 干熱滅菌箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用方法: 1. 適宜用干熱滅菌

24、箱滅菌的物品是玻璃器皿和金屬器皿,而塑料制品、橡皮制品、天然和化學(xué)纖維制品、培養(yǎng)基等,均不適用干熱滅菌。 2進(jìn)箱,物品放在干熱滅菌箱中的鐵擱板上,關(guān)箱門。 3. 定溫,常用滅菌溫度為160或170。 4. 滅菌,接通電源,干熱滅菌箱升溫至定溫滅菌,160維持2h,170維持11.5h。 5. 出箱,關(guān)斷電源,待溫度下降至50左右,開箱門取出被滅菌的物品。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),注意: 1、滅菌時(shí),溫度不宜超過(guò)170,以免易燃物,如棉塞、包扎紙等被燒焦。 2、高溫時(shí),切勿開箱門,以免冷空氣驟然進(jìn)入使滅菌的玻璃器皿炸裂。 3、絕不允許先將溫度上升到100以上再放器皿,以免玻璃器皿驟然在高溫

25、下炸裂。 干熱滅菌箱用于烘干玻璃器皿時(shí),定溫120,持續(xù)30min即可。須打開頂部氣孔,以利水蒸氣散出。可啟動(dòng)箱內(nèi)鼓風(fēng)設(shè)備,加速干燥。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),(二)高壓蒸汽滅菌器 高壓蒸汽滅菌器的滅菌效果比干熱滅菌箱好,適用所有物品滅菌,通常用于培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄培養(yǎng)物、耐高熱高壓的藥品、紗布等滅菌。高壓蒸汽滅菌器有手提式、直立式和橫臥式幾種,它們的構(gòu)造和滅菌原理是一樣的,僅是容量不同而已。手提式高壓蒸汽滅菌器容積最小,業(yè)務(wù)小的實(shí)驗(yàn)室大多使用它;橫臥式高壓蒸汽滅菌器容積大,只有大型實(shí)驗(yàn)室或生產(chǎn)上使用。一般實(shí)驗(yàn)室常使用直立式高壓蒸汽滅菌器。直立式高壓蒸汽滅菌器見圖1-4。,1.3 常

26、用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-4 高壓蒸汽滅菌器,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用方法: 1. 加水 立式鍋可直接加水至鍋內(nèi)底部隔板以下2/3高處;有加水口和水位窗者,由加水口加水至止水線處。 2. 裝鍋 把需滅菌的器物放入鍋內(nèi)(器物不要裝得太滿,以免影響滅菌效果),蓋好鍋蓋,將螺旋柄擰緊(對(duì)角式均勻擰緊),打開排氣閥。 3. 點(diǎn)火 啟動(dòng)開關(guān),電加熱器工作。 4. 排放冷空氣 鍋內(nèi)水沸騰后,蒸汽逐漸驅(qū)趕鍋內(nèi)冷空氣,當(dāng)溫度計(jì)指針指向100時(shí),證明鍋內(nèi)已充滿蒸汽,冷空氣被驅(qū)盡,關(guān)閉排氣閥。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),5. 升壓、保壓與滅菌 關(guān)閉排氣閥以后,鍋內(nèi)成為密閉系統(tǒng),蒸汽不斷增多,壓力計(jì)和

27、溫度計(jì)的指針上升,當(dāng)壓力達(dá)到0.1MPa,溫度為121時(shí),開始滅菌計(jì)時(shí);控制熱源,維持0.1Mpa、12130min即完成滅菌。 6. 降壓與排氣 完成滅菌后停止加熱,任滅菌鍋?zhàn)匀焕鋮s降壓。當(dāng)壓力降至0.025MPa以下后,可打開排氣閥排除余汽。 7. 出鍋 待鍋內(nèi)壓力降至大氣壓時(shí)揭開鍋蓋,取出器物,排掉鍋內(nèi)剩余水。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.4 冰箱 用于儲(chǔ)存培養(yǎng)基和培養(yǎng)物的設(shè)備,儲(chǔ)存病毒必須使用低溫冰箱,儲(chǔ)存一般培養(yǎng)基和培養(yǎng)物用普通冰箱即可。 低溫冰箱整個(gè)箱壁內(nèi)側(cè)圍繞冷卻管,可保持2070左右的低溫。 使用冰箱時(shí),必須注意以下事項(xiàng): 1.冰箱適用電壓與所供電壓一致。如所供電壓為

28、220V,而冰箱適用110V電壓時(shí),必須用變壓器調(diào)壓。 2.供電線路和保險(xiǎn)絲滿足冰箱的工作電流要求。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),3.使用時(shí),應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)至所需要的溫度。一般應(yīng)使水在冷卻室中結(jié)冰,使儲(chǔ)藏箱下部溫度為510左右。 4.當(dāng)冰箱冷卻室結(jié)冰太厚時(shí),會(huì)導(dǎo)致溫度調(diào)節(jié)器的不靈敏,此時(shí),必須停電融冰后,再投入使用。 5.冰箱門打開時(shí)間愈短愈好,打開次數(shù)越少越好。 6. 不宜將溫度過(guò)高的物品放入冰箱內(nèi),以免消耗電能過(guò)大、機(jī)件工作時(shí)間過(guò)長(zhǎng),縮短冰箱使用壽命。 7. 冰箱內(nèi)應(yīng)保持整潔,如箱內(nèi)有霉菌生長(zhǎng),應(yīng)清洗并用福爾馬林熏蒸消毒。 8. 保存烈性病菌、病毒的冰箱,要專人保管,并要加鎖。,1.3 常

29、用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.5 水浴鍋 水浴箱也叫水溫箱,用于融化培養(yǎng)基和各種保溫操作。該設(shè)備是金屬制成的長(zhǎng)方形箱,箱內(nèi)盛水,箱底裝有電熱絲,并有自動(dòng)調(diào)節(jié)溫度裝置控制溫度恒定。如圖1-5所示。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-5 水浴箱,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.6 細(xì)菌過(guò)濾器 目前常用的濾器有混合材質(zhì)和全玻材質(zhì)。如圖1-6所示。 (一)蔡氏濾器 蔡氏濾器為金屬制成的杯狀漏斗,在杯的底部夾一層石棉濾板,濾板下有一塊金屬篩板,防止抽氣時(shí)石棉濾板下陷。 按濾孔的大小,石棉板分為三種: 1. K號(hào),濾孔最大,可濾除一般顆粒物。 2. KK號(hào),濾孔較小,為濾除大多數(shù)細(xì)菌。 3. EKS

30、號(hào),濾孔更小,可濾除較大病毒。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-6 細(xì)菌過(guò)濾器,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),(二)玻璃濾器 該器組件全部為玻璃質(zhì),其中,濾板由玻璃細(xì)紗加熱壓成,分1、2、3、4、5、6共六級(jí)。號(hào)碼愈大,孔徑愈小,孔徑0.152.0m不等,5和6級(jí)可阻止細(xì)菌通過(guò)。 玻璃濾器用后要立即處理。過(guò)濾病原微生物后的濾器,要先用不凝固蛋白質(zhì)的消毒藥劑浸泡3天,以免堵塞濾孔;消毒后的濾器,用蒸餾水倒抽;再在濾器內(nèi)加入三分之二洗滌液,自然流出氧化殘留物;再先后用自來(lái)水、蒸餾水抽吸過(guò)濾至濾液呈中性為止。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),如果濾器的濾孔被凝固的蛋白質(zhì)顆粒堵塞,可將濾器浸泡于37

31、的1%胰蛋白酶溶液(pH7.47.6)中消化24h,再按上法抽洗清潔。 濾器為負(fù)壓過(guò)濾,需要連接一抽濾瓶,將濾瓶嘴用橡皮管連接于抽氣機(jī)上抽氣過(guò)濾。過(guò)濾負(fù)壓不宜低于(46.666.6)KPa(350500mmHg),可用水銀真空計(jì)指示,也可觀察濾瓶?jī)?nèi)濾出液情況判斷。如濾液出現(xiàn)大量氣泡,說(shuō)明負(fù)壓過(guò)高,宜關(guān)閉抽氣機(jī),停止抽氣,待氣泡消逝后再抽。抽濾瓶的嘴應(yīng)塞入少量棉花,以防放氣時(shí)空氣中細(xì)菌沖入瓶?jī)?nèi)。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.7 超凈工作臺(tái) 用于創(chuàng)造局部無(wú)菌環(huán)境的設(shè)備。超凈工作臺(tái)是一個(gè)由預(yù)過(guò)濾器、高效過(guò)濾器、空氣幕風(fēng)機(jī)有效排除空氣中的懸浮灰塵、微生物,由紫外燈或噴霧滅菌,裝有照明燈、操作

32、臺(tái)面板、配電裝置,并有消音、減震設(shè)備的箱體,如圖1-7所示。超凈工作臺(tái)是沒有建設(shè)無(wú)菌室的微生物實(shí)驗(yàn)室的必備設(shè)備,也可用于有更嚴(yán)格無(wú)菌要求或其他小環(huán)境條件要求的微生物接種、分離和鑒定等操作。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-7 超凈工作臺(tái),1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用超凈工作臺(tái)應(yīng)注意以下幾點(diǎn): 1清除工作臺(tái)內(nèi)的灰塵、雜物。 2在使用超凈工作臺(tái)進(jìn)行無(wú)菌操作前30min啟動(dòng)過(guò)濾、通風(fēng)裝置,檢測(cè)操作區(qū)氣流速度、潔凈度,并滅菌。 3穿緊口工作服,戴緊口帽。 4. 嚴(yán)禁在超凈工作臺(tái)前做任何可能增加空氣灰塵量的動(dòng)作。 5. 必須在超凈工作臺(tái)內(nèi)使用的物品要放在下風(fēng)側(cè)。 6. 在超凈工作臺(tái)內(nèi)使用的物品

33、必須是不易起纖塵的。 7. 在全部無(wú)菌操作結(jié)束后,才能停止工作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)。 8. 定期進(jìn)行性能檢測(cè)。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.8 電動(dòng)抽氣機(jī) 電動(dòng)抽氣機(jī)又叫真空泵,由電動(dòng)機(jī)轉(zhuǎn)輪、輪帶和偏心輪等組成。通電后,電動(dòng)機(jī)帶動(dòng)偏心輪,即可將與其相關(guān)的容器內(nèi)的空氣抽出。如圖1-8所示。 電動(dòng)抽氣機(jī)主要供細(xì)菌過(guò)濾器、厭氧培養(yǎng)、培養(yǎng)基過(guò)濾和真空干燥時(shí)抽氣用。使用抽氣機(jī)時(shí),應(yīng)注意以下事項(xiàng): 1. 抽氣機(jī)的適用電壓要與所供電壓一致,否則,要經(jīng)變壓器變壓后才能使用。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),2. 要保持機(jī)油箱內(nèi)的油量,防止機(jī)器損壞。 3. 必須使用硬質(zhì)的連接管,保證氣路暢通以確保器皿內(nèi)抽真空效果。

34、4被抽氣的器皿,必須有良好的抗壓性能,以防內(nèi)部真空后被外部空氣破碎。 5如果在抽濾過(guò)程中濾液出現(xiàn)大量氣泡,可以暫時(shí)停機(jī),待氣泡消失后,再開機(jī)繼續(xù)抽氣。 6如果要作冷凍干燥,則需用精密度高、功率大的抽氣機(jī)。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-8 電動(dòng)抽氣機(jī),1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.9 電動(dòng)離心機(jī) 離心機(jī)為進(jìn)行病菌病毒檢驗(yàn)鑒定中不可缺少的工具。離心機(jī)的種類很多,實(shí)驗(yàn)室常用小型傾斜電動(dòng)離心機(jī)。小型傾斜電動(dòng)離心機(jī)機(jī)頂正中有孔蓋,以便放入和取出離心試管,內(nèi)有離心管座四或六個(gè),均勻地繞離心軸排列,底座上裝有開關(guān)和調(diào)速器。如圖1-9所示。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),圖1-9 小型傾斜電動(dòng)

35、離心器,A-離心機(jī)斷面 1.轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)器 2.電動(dòng)機(jī) 3.金屬套管 4.護(hù)蓋 5.玻管; B-離心器全形 6.蓋,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),使用離心機(jī)時(shí)應(yīng)注意: 1. 應(yīng)放在平穩(wěn)的地方,并保持水平。 2將裝有標(biāo)本的離心試管放入離心管座的金屬套管內(nèi),兩兩成對(duì),每個(gè)重量基本平衡。 3放好試管后,蓋上孔蓋。 4開啟電源開關(guān),先用最低轉(zhuǎn)速,逐漸調(diào)節(jié)到最高轉(zhuǎn)速。 5. 達(dá)到離心時(shí)間后,逐步降低轉(zhuǎn)速,待降到最低轉(zhuǎn)速后,關(guān)閉電源開關(guān)。 6待離心機(jī)自然停止轉(zhuǎn)動(dòng),打開孔蓋,取出離心試管。 7. 離心試管須加棉塞時(shí),離心前應(yīng)將棉塞上端用橡皮圈扎緊在試管外或用大頭針別住,以免離心時(shí)棉塞沉入管內(nèi)。 8. 應(yīng)經(jīng)常保持

36、轉(zhuǎn)軸潤(rùn)滑。,1.3 常用儀器及其使用要領(lǐng),1.3.10 天平 (一)粗天平 粗天平又稱工業(yè)天平或藥物天平,是用于粗略稱量的儀器。常用的有100g、200g、500g、1000g四種,感量為千分之一,供配制普通試劑和粗略稱量之用。 (二)電子天平 這類天平只有一個(gè)盤,構(gòu)造比一般天平復(fù)雜,但使用起來(lái)卻十分方便。,返回,1.4 常用器皿,1.4.1 常用的玻璃器皿 微生物實(shí)驗(yàn)室常用的玻璃器皿見表1-1所示。,表1-1 常用的玻璃器皿,1.4 常用器皿,1.4.2 常用的玻璃器皿的洗滌與消毒 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的培養(yǎng)皿、試管和三角瓶等的洗滌、消毒質(zhì)量,直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,因此,這項(xiàng)工作不容忽視。 (一)

37、新玻璃器皿的洗滌法 新購(gòu)置的玻璃器皿含有游離堿,應(yīng)用2%的鹽酸溶液浸泡數(shù)小時(shí),再用水充分沖洗干凈。,1.4 常用器皿,(二)含有瓊脂培養(yǎng)基的玻璃器皿的洗滌法 先用小刀或鐵絲將器皿中的瓊脂培養(yǎng)基刮下。如果瓊脂培養(yǎng)基已經(jīng)干燥,可將器皿放在水中蒸煮,使瓊脂熔化后趁熱倒出,用水洗滌,并用刷子沾肥皂擦洗內(nèi)壁,然后用自來(lái)水洗去肥皂。是否已將油垢完全除去,可以這樣檢查:即將瓶子或試管的外壁擦干,如果水在內(nèi)壁是均勻地分布一薄層,可以認(rèn)為是將油垢除去了。如果經(jīng)過(guò)這樣洗滌的器皿,油垢還未洗凈,就需用洗滌液來(lái)清洗。,1.4 常用器皿,(三)載玻片及蓋玻片的洗滌法 新載玻片和蓋玻片先在2%的鹽酸溶液中浸1h,以后用自

38、來(lái)水沖洗23次,最后用蒸餾水換洗23次。也可用1%的洗衣粉洗滌,新載玻片用洗衣粉洗滌時(shí),先將洗衣粉液煮沸,然后將要洗的新載玻片散入煮沸液中,持續(xù)煮沸1520min(注意煮沸液一定要浸沒玻片,否則會(huì)使玻片鈣化變質(zhì)),待冷后用自來(lái)水沖洗至中性。新蓋玻片用洗衣粉洗滌時(shí),將蓋玻片散入1%的洗衣粉液中,煮沸l(wèi)min,待沸點(diǎn)泡平下后,再煮沸1min,。,1.4 常用器皿,1.4.3 常用的玻璃器皿的包裝 玻璃器皿使用前必須經(jīng)過(guò)滅菌,而滅菌前應(yīng)預(yù)先將玻璃器皿包裝好。 (一)棉塞的制作 常見的做法有:將棉花鋪成方形,對(duì)角方向不完全對(duì)折,垂直于對(duì)折線方向卷起來(lái),如圖1-10所示;或?qū)⒚藁ㄤ伋煞叫危谄渲醒胍r以小

39、塊棉花,再將四邊棉花包攏。制作好的棉塞最好用紗布包好,以利于使用和保存。另外,也可根據(jù)需要,購(gòu)買市售的泡沫塑料塞。,1.4 常用器皿,圖1-10 棉塞的制作過(guò)程,1.4 常用器皿,制作質(zhì)量好的棉塞的形狀、大小、松緊,應(yīng)與試管口(或三角瓶口)完全適合。過(guò)緊會(huì)妨礙空氣流通,不便塞拔,過(guò)松則達(dá)不到濾菌的目的。棉塞過(guò)大,塞不進(jìn)試管口(或三角瓶口),過(guò)小則容易掉進(jìn)試管內(nèi)。正確的棉塞,塞頭較大,約占棉塞總長(zhǎng)的1/3,留在管外,塞體約占棉塞總長(zhǎng)的2/3,塞在管內(nèi),如圖1-11所示。 棉塞應(yīng)塞在試管內(nèi),用報(bào)紙或牛皮紙包裝后一道滅菌。,1.4 常用器皿,圖1-11 試管帽和棉塞,1.試管帽;2.正確的棉塞;3.

40、4.不正確的棉塞,1.4 常用器皿,(二)吸管的包扎 將非脫脂棉塞入管尾,長(zhǎng)度約2cm,后端距尾口1.5cm,松緊要適當(dāng),以吹氣時(shí)通氣流暢而不滑動(dòng)為度。將吸管尖端以30角放在寬45cm、長(zhǎng)55cm的紙條(報(bào)紙或牛皮紙)的一端,折返紙頭包住管尖后,以螺旋形式包裹吸管,將包裹卷緊的紙棒在管尾端打一個(gè)結(jié),以防吸管脫出。如圖1-12所示,包好后等待滅菌。,1.4 常用器皿,圖1-12 單支刻度吸管的包扎,1.4 常用器皿,(三)培養(yǎng)皿的包扎 培養(yǎng)皿可按4套或8套為一疊,用紙包扎好,如圖1-13所示,待滅菌?;蛑苯訉⑴囵B(yǎng)皿裝入金屬筒內(nèi)進(jìn)行干熱殺菌。,圖1-13 培養(yǎng)皿的包扎,返回,1.5 小型微生物廠主要儀器及設(shè)備,小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備見表1-2。 表1-2 小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備一覽表,1.5 小型微生物廠主要儀器及設(shè)備,表1-2(續(xù))小型微生物廠的主要儀器及設(shè)備一覽表,

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