《1-2基因工程的基本操作程序(新)XXXX(2)》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《1-2基因工程的基本操作程序(新)XXXX(2)（49頁珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、1、結(jié)合圖，判斷下列有關(guān)基因工程的工具酶功能的敘、結(jié)合圖，判斷下列有關(guān)基因工程的工具酶功能的敘述，正確的是述，正確的是 ()。A切斷切斷a處的酶為限制性核酸內(nèi)切酶處的酶為限制性核酸內(nèi)切酶B連接連接a處的酶為處的酶為DNA聚合酶聚合酶C切斷切斷b處的酶為限制性核酸內(nèi)切酶處的酶為限制性核酸內(nèi)切酶D切斷切斷c處的為限制性核酸內(nèi)切酶處的為限制性核酸內(nèi)切酶cADNADNA連接酶連接酶解旋酶解旋酶DNADNA水解酶水解酶1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、目的基因的一、目的基因的獲取獲取二、基因表達(dá)二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建載體的構(gòu)建三、將目的基因三、將目的基因?qū)?/p>

2、導(dǎo)入受體細(xì)胞受體細(xì)胞四、目的基因的四、目的基因的檢測(cè)檢測(cè)與與鑒定鑒定一、一、目的基因目的基因的獲取的獲取主要是編碼蛋白質(zhì)的主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因2 2、獲取方法：、獲取方法：1 1、目的基因目的基因:1）從基因文庫中獲取目的基因）從基因文庫中獲取目的基因基因文庫基因文庫:將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多DNADNA片段片段,導(dǎo)入導(dǎo)入受體受體菌菌的群體中儲(chǔ)存的群體中儲(chǔ)存,各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因的基因,稱為基因文庫稱為基因文庫(gene library)(gene library)分類：分類：基因組文庫基因組文庫:

3、包含了一種生物包含了一種生物所有所有的基因的基因文庫的基因的基因文庫。構(gòu)建方法：構(gòu)建方法：限制酶切法限制酶切法部分基因文庫（如部分基因文庫（如cDNAcDNA文庫文庫):):包含了一種生物的包含了一種生物的一部一部分分基因的基因文庫?；虻幕蛭膸臁?gòu)建方法：構(gòu)建方法：逆轉(zhuǎn)錄法逆轉(zhuǎn)錄法用限制酶切斷用限制酶切斷成許多片段成許多片段某生物體內(nèi)某生物體內(nèi)全部全部DNADNA 許多許多DNADNA片段片段受體菌群體受體菌群體1、從基因文庫中獲取目的基因、從基因文庫中獲取目的基因限制酶限制酶與運(yùn)載體連接與運(yùn)載體連接 導(dǎo)入導(dǎo)入基因組文庫基因組文庫某種生物某個(gè)時(shí)期的某種生物某個(gè)時(shí)期的mRNAmRNAcDNA

4、cDNA反轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄受體菌群體受體菌群體與運(yùn)載體連接與運(yùn)載體連接 導(dǎo)入導(dǎo)入部分基因文庫部分基因文庫（cDNA文庫）文庫）外顯子內(nèi)含子與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)編碼區(qū)原核生物基因原核生物基因真核生物基因真核生物基因mRNA與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子12345非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄mRNAmRNA前體前體加工加工成熟成熟mRNAmRNA翻譯翻譯肽鏈肽鏈一、一、目的基因目的基因的獲取的獲取主要是編碼蛋白質(zhì)的主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因2 2、獲取方法：、獲取方法：1

5、1、目的基因目的基因:1）從基因文庫中獲取目的基因）從基因文庫中獲取目的基因2 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因2、利用利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 概念：概念：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外復(fù)制，在生物體外復(fù)制特定特定DNADNA片段的核酸合成技術(shù)。可以獲得大量的片段的核酸合成技術(shù)?？梢垣@得大量的目的基因。目的基因。條件：條件：_、_、_(_(做啟動(dòng)子做啟動(dòng)子)、_ _._.原理：原理：_DNADNA復(fù)制復(fù)制模板模板DNADNA四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸一對(duì)引物一對(duì)引物熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增

6、循環(huán)循環(huán)變性變性退火退火延伸延伸方式：方式：以以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）指數(shù)指數(shù)2 2n n利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因過程：過程：使使目的基因目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增結(jié)果：結(jié)果：加熱至：加熱至9095，使，使DNA解旋；解旋；：冷卻到：冷卻到5560，2個(gè)引物分別與個(gè)引物分別與DNA單鏈結(jié)合；單鏈結(jié)合；：加熱至：加熱至7075，熱穩(wěn)定，熱穩(wěn)定DNA聚合酶開始互補(bǔ)鏈聚合酶開始互補(bǔ)鏈的合成。的合成。氫氫鍵斷裂鍵斷裂與體內(nèi)與體內(nèi)DNA復(fù)制的區(qū)別：復(fù)制的區(qū)別：不需要解旋酶；：不需要解

7、旋酶；：需加入引物：需加入引物 （前提：已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物）（前提：已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物）：需熱穩(wěn)定：需熱穩(wěn)定DNA聚合酶聚合酶(Taq酶酶)；與體內(nèi)與體內(nèi)DNA復(fù)制的相同點(diǎn)：復(fù)制的相同點(diǎn)：(1)模板：均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板模板：均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板(2)原料：均為四種脫氧核苷酸原料：均為四種脫氧核苷酸(3)酶：均需酶：均需DNA聚合酶聚合酶(4)引物：都需要引物，引物：都需要引物，使使DNA聚合酶從引物的聚合酶從引物的3端開始連接脫氧核苷酸端開始連接脫氧核苷酸一、一、目的基因目的基因的獲取的獲取主要是編碼蛋白質(zhì)的主要是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因結(jié)

8、構(gòu)基因2 2、獲取方法：、獲取方法：1 1、目的基因目的基因:3 3）化學(xué)方法人工合成）化學(xué)方法人工合成DNADNA合成儀合成儀1）從基因文庫中獲取目的基因）從基因文庫中獲取目的基因2 2）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因3、人工合成法 在基因較小，核苷酸序列已知的在基因較小，核苷酸序列已知的前提前提下下，可，可以利用以利用DNADNA合成儀人工合成合成儀人工合成蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成推測(cè)推測(cè)推測(cè)推測(cè)思考：思考：化學(xué)法合化學(xué)法合成的目的基因含成的目的基因含

9、內(nèi)含內(nèi)含子、啟動(dòng)子和終止子子、啟動(dòng)子和終止子嗎？嗎？二二.基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建1、載體載體構(gòu)建構(gòu)建目的：目的：2 2、基因表達(dá)載體的組成、基因表達(dá)載體的組成啟動(dòng)子啟動(dòng)子+目的基因目的基因+終止子終止子+標(biāo)記基因標(biāo)記基因-核心核心（P11）同時(shí)使目的基因能夠同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和表達(dá)和發(fā)揮作用。發(fā)揮作用。使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存穩(wěn)定存在在，并且，并且可以遺傳可以遺傳給下一代，給下一代，表達(dá)載體啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子：終止子：終止子：位置位置:首端首端本質(zhì)本質(zhì):DNA功能功能:有與有與RNA聚合聚合酶結(jié)合的位點(diǎn)，酶結(jié)合的位點(diǎn)，能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄能驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄位置位置:尾端尾

10、端本質(zhì)本質(zhì):能終止轉(zhuǎn)錄能終止轉(zhuǎn)錄3、基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程特別提醒特別提醒該過程把三種工具該過程把三種工具(兩種工具酶、一種載兩種工具酶、一種載體體)全用上了，是全用上了，是最核心、最關(guān)鍵最核心、最關(guān)鍵的一步，在體外進(jìn)行。的一步，在體外進(jìn)行。思考：思考：如果用同一種限制性內(nèi)切酶，如果用同一種限制性內(nèi)切酶，處理質(zhì)粒和目的基因，并將產(chǎn)物處理質(zhì)粒和目的基因，并將產(chǎn)物放在一起用連接酶連接它們，最放在一起用連接酶連接它們，最后可以產(chǎn)生多少種環(huán)狀的后可以產(chǎn)生多少種環(huán)狀的DNA分分子？子？你認(rèn)為它們是怎么組成的？你認(rèn)為它們是怎么組成的？三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞動(dòng)物、植物、微生物。

11、動(dòng)物、植物、微生物。（1 1）.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞最常用最常用方法、經(jīng)濟(jì)有效方法、經(jīng)濟(jì)有效目的基因目的基因進(jìn)入進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞中中維持穩(wěn)定和表達(dá)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。的過程。1 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 適用范圍：適用范圍：雙子葉雙子葉植物和植物和裸子裸子植物；植物；(2)(2)原理：原理：TiTi質(zhì)粒質(zhì)粒上的上的T-DNAT-DNA可以可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)

12、胞染色體的細(xì)胞染色體的DNADNA上。上。三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌植物細(xì)胞植物細(xì)胞導(dǎo)入導(dǎo)入穩(wěn)定維持和表達(dá)穩(wěn)定維持和表達(dá)過程：過程：（1 1）.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法2）基因槍法）基因槍法3）花粉管通道法）花粉管通道法三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞最常用最常用方法、經(jīng)濟(jì)有效方法、經(jīng)濟(jì)有效單子葉植物常用、準(zhǔn)確但單子葉植物常用、準(zhǔn)確但成本高成本高我國(guó)獨(dú)創(chuàng)、我國(guó)獨(dú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)目的基因目的基因進(jìn)入

13、進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞中中維持穩(wěn)定和表達(dá)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。的過程。（2 2）.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞-顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)2 2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞1.1.方法：方法：顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)2.2.受體細(xì)胞：受體細(xì)胞：受精卵受精卵 3.3.程序程序:目的基因表達(dá)載體提純目的基因表達(dá)載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵）顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物（1 1）.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法2）基因槍法）基因槍法3）花粉管通道法）花粉管通道法三、

14、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（2 2）.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（3 3）.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞-Ca2+處理處理-顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)最常用最常用方法、經(jīng)濟(jì)有效方法、經(jīng)濟(jì)有效單子葉植物常用、準(zhǔn)確但單子葉植物常用、準(zhǔn)確但成本高成本高我國(guó)獨(dú)創(chuàng)、我國(guó)獨(dú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)目的基因目的基因進(jìn)入進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞受體細(xì)胞內(nèi)并在受體細(xì)胞中中維持穩(wěn)定和表達(dá)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。的過程。3)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞微生物作受體細(xì)胞原因微生物作受體細(xì)胞原因

15、：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少常用菌：常用菌：大腸桿菌大腸桿菌常用法：常用法：CaCa 處理處理獲得感受態(tài)細(xì)胞獲得感受態(tài)細(xì)胞過程：過程：方方 法法 受體受體 細(xì)胞細(xì)胞 其他處理其他處理 或特點(diǎn)或特點(diǎn)植物植物細(xì)胞細(xì)胞農(nóng)桿菌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化法法基因槍法基因槍法花粉管花粉管通道通道法法體細(xì)胞、體細(xì)胞、受精卵受精卵植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（脫分化和再分化）（脫分化和再分化）動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞顯微注射法顯微注射法受精卵受精卵動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)早期胚胎培養(yǎng)早期胚胎培養(yǎng)胚胎移植或胚胎分割胚胎移植或胚胎分割移植移植微生物細(xì)胞微生物細(xì)胞Ca2+Ca2+處理法處理法（感受

16、態(tài)細(xì)胞）（感受態(tài)細(xì)胞）原核細(xì)胞原核細(xì)胞繁殖快，多為單細(xì)胞，繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)少遺傳物質(zhì)少（農(nóng)桿菌（農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的質(zhì)粒的T-DNA的特點(diǎn)：即能進(jìn)入受體細(xì)胞，的特點(diǎn)：即能進(jìn)入受體細(xì)胞，又能與受體細(xì)胞的染色體又能與受體細(xì)胞的染色體DNA整合）整合）雙子葉、雙子葉、裸子裸子 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定導(dǎo)入過程完成后，全部受體細(xì)胞都能攝導(dǎo)入過程完成后，全部受體細(xì)胞都能攝 入重組入重組DNADNA分子嗎？分子嗎？1 12 2目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否都能穩(wěn)定目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否都能穩(wěn)定維持和表達(dá)？維持和表達(dá)？四、目的基因的檢測(cè)與鑒定四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1 1、分子水平、分子水平 檢

17、測(cè)檢測(cè)2 2、個(gè)體水、個(gè)體水平鑒定平鑒定檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等DNADNA分子雜交分子雜交DNA-RNADNA-RNA分子雜交分子雜交抗原抗原抗體雜交抗體雜交轉(zhuǎn)基因生轉(zhuǎn)基因生物的物的DNA含目的基含目的基因的因的DNA單鏈為單鏈為探探針針15151414方法方法 DNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)DNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 用用DNA分

18、子雜交技術(shù)可鑒定兩個(gè)物種之間的分子雜交技術(shù)可鑒定兩個(gè)物種之間的親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近。將兩種生物的將兩種生物的DNA分子的分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會(huì)結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。如果如果雜合部位多，則親緣關(guān)系近，反之則遠(yuǎn)。雜合部位多，則親緣關(guān)系近，反之則遠(yuǎn)。1、鑒定分子水平的鑒定方法方法 分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)探針探針1515轉(zhuǎn)基因生物轉(zhuǎn)基因

19、生物的的mRNA14141、鑒定分子水平的鑒定提取提取蘇云金桿菌蘇云金桿菌Bt毒素蛋白毒素蛋白將將Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠體內(nèi)射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出從小鼠血管抽出血液分離出抗血液分離出抗Bt毒素的抗體毒素的抗體抗體抗體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 出現(xiàn)出現(xiàn)雜交帶雜交帶脫分化脫分化組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)2、鑒定個(gè)體水平的鑒定抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)，活性比較實(shí)驗(yàn)抗蟲、抗病接種實(shí)驗(yàn)，活性比較實(shí)驗(yàn)例：用棉鈴飼喂棉例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基目的基因或攝入目的基因未表達(dá)。如蟲吃后中因未表達(dá)。如蟲吃后中毒死亡，則說明攝入了毒死亡，則說明攝入

20、了抗蟲基因并得到表達(dá)?？瓜x基因并得到表達(dá)。四、目的基因的檢測(cè)與鑒定四、目的基因的檢測(cè)與鑒定1 1、分子水平、分子水平 檢測(cè)檢測(cè)2 2、個(gè)體水、個(gè)體水平鑒定平鑒定檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等DNADNA分子雜交分子雜交DNA-RNADNA-RNA分子雜交分子雜交抗原抗原抗體雜交抗體雜交考法考法方法方法過程過程導(dǎo)入導(dǎo)入檢測(cè)檢測(cè)外源基因是外源基因是否與

21、受體細(xì)否與受體細(xì)胞的染色體胞的染色體整合整合DNADNA分分子雜交子雜交用放射性同位素或熒光分子標(biāo)記的目的基因用放射性同位素或熒光分子標(biāo)記的目的基因的單鏈做探針，與轉(zhuǎn)基因生物的基因組的單鏈做探針，與轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNADNA雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶。雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶。表達(dá)表達(dá)檢測(cè)檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄是否轉(zhuǎn)錄分子分子雜交雜交用放射性同位素或熒光分子標(biāo)記的目的基因用放射性同位素或熒光分子標(biāo)記的目的基因的單鏈做探針，與轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞中的的單鏈做探針，與轉(zhuǎn)基因生物細(xì)胞中的mRNAmRNA雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶。雜交，觀察是否出現(xiàn)雜交帶。表達(dá)表達(dá)檢測(cè)檢測(cè)是否翻譯是否翻譯抗原抗原-抗抗體雜交體雜交從

22、轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原抗體雜交，觀察是否出現(xiàn)反應(yīng)。進(jìn)行抗原抗體雜交，觀察是否出現(xiàn)反應(yīng)。個(gè)體個(gè)體水平水平檢測(cè)檢測(cè)比較簡(jiǎn)單的比較簡(jiǎn)單的方法方法抗蟲或抗抗蟲或抗病實(shí)驗(yàn)病實(shí)驗(yàn)如，轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀，讓如，轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀，讓害蟲食用轉(zhuǎn)基因植物的葉片，觀察其是否死害蟲食用轉(zhuǎn)基因植物的葉片，觀察其是否死亡。亡?；蛞蚬すこ坛痰牡幕颈静俨僮髯鞒坛绦蛐蚰康幕虻墨@取目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測(cè)與鑒定目的基因的檢測(cè)與鑒定1、從基因文庫中獲取目

23、的基因、從基因文庫中獲取目的基因2、利用、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因3、化學(xué)方法人工合成、化學(xué)方法人工合成目的基因目的基因 +啟動(dòng)子啟動(dòng)子 +終止子終止子 +標(biāo)記基因標(biāo)記基因農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射法、顯微注射法、CaCa2+2+處理法處理法DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)DNA-RNADNA-RNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)抗原抗原抗體雜交技術(shù)抗體雜交技術(shù)個(gè)體水平鑒定個(gè)體水平鑒定分子檢測(cè)分子檢測(cè)鞏固練習(xí)鞏固練習(xí):1.人們常選用的細(xì)菌質(zhì)粒分子往往帶有一個(gè)抗生素抗性基因人們常選用的細(xì)菌質(zhì)粒分子往往帶有一個(gè)抗生素抗性基因

24、,該該抗性基因的主要作用是抗性基因的主要作用是 ()A.提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性B.有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)C.增加質(zhì)粒分子的分子量增加質(zhì)粒分子的分子量D.便于與外源基因連接便于與外源基因連接2.在遺傳工程技術(shù)中在遺傳工程技術(shù)中,限制性內(nèi)切酶主要用于限制性內(nèi)切酶主要用于 ()A.目的基因的提取和導(dǎo)入目的基因的提取和導(dǎo)入B.目的基因的提取和檢測(cè)目的基因的提取和檢測(cè)C.目的基因與載體的結(jié)合和導(dǎo)入目的基因與載體的結(jié)合和導(dǎo)入D.目的基因的提取與載體結(jié)合目的基因的提取與載體結(jié)合BD3.在遺傳工程技術(shù)中在遺傳工程技術(shù)中,下列何

25、種目的基因一般以直接分下列何種目的基因一般以直接分離的方法獲得離的方法獲得 ()A.人的胰島素基因人的胰島素基因 B.蠶的蠶絲蛋白基因蠶的蠶絲蛋白基因C.芽孢桿菌的抗蟲基因芽孢桿菌的抗蟲基因 D.菜豆儲(chǔ)藏蛋白基因菜豆儲(chǔ)藏蛋白基因4.1976年年,美國(guó)的科學(xué)家首次將人的生長(zhǎng)抑制素釋放美國(guó)的科學(xué)家首次將人的生長(zhǎng)抑制素釋放因子的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌因子的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌,并獲得了表達(dá)并獲得了表達(dá),此文中的此文中的表達(dá)是指該基因在大腸桿菌表達(dá)是指該基因在大腸桿菌 ()A.能進(jìn)行能進(jìn)行DNA復(fù)制復(fù)制B.能傳遞給細(xì)菌后代能傳遞給細(xì)菌后代C.能合成生長(zhǎng)抑制素釋放因子能合成生長(zhǎng)抑制素釋放因子D.能合成人的生長(zhǎng)

26、素能合成人的生長(zhǎng)素CC5.基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的,在基因操作的基本步驟中,不進(jìn)行減基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 ()A.人工合成目的基因B.目的基因與載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C原核原核生物基因表達(dá)的調(diào)生物基因表達(dá)的調(diào) 控控 lacZ lacY lacA 調(diào)節(jié)基調(diào)節(jié)基 因因啟動(dòng)啟動(dòng) 子子 操縱基操縱基 因因結(jié)構(gòu)基結(jié)構(gòu)基 因因RNA聚合酶聚合酶信使信使 RNA轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 錄錄翻翻 譯譯阻抑阻抑 物物乳糖乳糖 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 錄錄半乳糖苷酶半乳糖苷酶 酶酶 酶酶 1、下列四條、下列四條DNA分子，彼此間具有分子，彼此間具有粘性末端的一組是粘性末端的一組是()A B C D

27、D3、已知限制酶已知限制酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GGATCC，限制酶限制酶的識(shí)別序列和切點(diǎn)是的識(shí)別序列和切點(diǎn)是GATC。根據(jù)圖。根據(jù)圖示判斷下列操作正確的是（示判斷下列操作正確的是（）A目的基因和質(zhì)粒均用限制酶目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割切割B目的基因和質(zhì)粒均用限制酶目的基因和質(zhì)粒均用限制酶切割切割C質(zhì)粒用限制酶質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割D質(zhì)粒用限制酶質(zhì)粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割，目的基因用限制酶切割切割C實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)推論實(shí)驗(yàn)推論在含青霉素培養(yǎng)在含青霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況基上生長(zhǎng)情況在含四環(huán)素培養(yǎng)基在含四環(huán)素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況上

28、生長(zhǎng)情況導(dǎo)入質(zhì)粒情況，及目的基因?qū)胭|(zhì)粒情況，及目的基因插入位置插入位置目的基因插入位置目的基因插入位置ABCD未未導(dǎo)入質(zhì)粒的導(dǎo)入質(zhì)粒的普通的普通的大腸桿菌大腸桿菌不能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，且位點(diǎn)在大腸桿菌，且位點(diǎn)在a a 能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，且位點(diǎn)在大腸桿菌，且位點(diǎn)在c c不能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的導(dǎo)入外源基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，且位點(diǎn)在大腸桿菌，且位點(diǎn)在b b或?qū)胭|(zhì)或?qū)胭|(zhì)粒的大腸桿菌粒的大腸桿菌能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)練一練練一練