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1、基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序n（1）目的基因的獲取目的基因的獲取n（2）n（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞n（4）目的基因的檢測與鑒定）目的基因的檢測與鑒定基因基因表達(dá)載體表達(dá)載體的構(gòu)建的構(gòu)建一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取1.什么叫基因文庫？什么叫基因文庫？將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到片斷，導(dǎo)入到中，中，各個受體菌分別含有這種生物的不同各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫?；?，稱為基因文庫?；蛭膸旎蛭膸?基因組文庫基因組文庫部分基因文庫部分基因文庫（cDNA文庫）文庫）基因組基因組DNAD

2、NA文庫文庫cDNAcDNA文庫文庫基因組基因組DNADNA文庫與文庫與cDNAcDNA文庫的比較文庫的比較補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非非編碼區(qū)編碼區(qū)非非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子啟動子終止子終止子 RNARNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開始后，轉(zhuǎn)錄開始后，RNARNA聚合酶沿聚合酶沿DNADNA分子移動，分子移動，并以并以DNADNA分子的一條鏈為模板合成分子的一條鏈為模板合成RNARNA。轉(zhuǎn)錄完畢后，轉(zhuǎn)錄完畢

3、后，RNARNA鏈釋放出來，緊接著鏈釋放出來，緊接著RNARNA聚合酶也從聚合酶也從DNADNA模板鏈上脫落下來。模板鏈上脫落下來。不能轉(zhuǎn)錄為信使不能轉(zhuǎn)錄為信使RNARNA，不能不能 編碼蛋白質(zhì)。編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNARNA，能能 編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì) 編編碼碼區(qū)區(qū)非非編編碼碼區(qū)區(qū)原原核核細(xì)細(xì)胞胞的的 基基因因結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核 苷酸序列，在該序列中，苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上最重要的是位于編碼區(qū)上 游的游的RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非非編碼區(qū)編碼區(qū)非非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)

4、上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 啟動子啟動子終止子終止子補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)補(bǔ)：真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子 不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子啟動子啟動子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子：內(nèi)含子：外顯子：外顯子：真真核核細(xì)細(xì)胞胞的的 基基因因結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼

5、蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，：有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的包括位于編碼區(qū)上游的RNARNA 聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非非編碼序列：編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄、加工修飾轉(zhuǎn)錄、加工修飾mRNA原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由都由能夠編碼蛋白質(zhì)的能夠編碼蛋白質(zhì)的_ _ _ 和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_ 區(qū)組成的區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思思考考編碼相同數(shù)目氨基酸的

6、蛋白質(zhì)，原核編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？連續(xù)連續(xù)不連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼非編碼DNAmRNA蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄翻譯翻譯基因組基因組文庫與文庫與部分基部分基因文庫因文庫的關(guān)系的關(guān)系小小大大無無有有無無有有某種生物的部分基因某種生物的部分基因 某種生物的全部基因某種生物的全部基因可以可以部分基因可以部分基因可以基因文庫與基因庫 基因庫是指某一生物群體中的全部基因?；蛭膸炫c基因克隆基因克隆是只包含某些特定基因或DNA片段的克隆?；蛭膸熘邪鵀閿?shù)眾多的克隆，建成后可供隨時選取其中任何一個基因克隆之用?；蚪M文庫的構(gòu)建模式

7、圖基因組文庫的構(gòu)建模式圖通過對通過對受體菌受體菌的培養(yǎng)的培養(yǎng)而儲存而儲存基因基因2.2.基因文庫的構(gòu)建方法基因文庫的構(gòu)建方法（1 1）鳥槍法鳥槍法（2 2）反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法（3 3）直接分離法直接分離法（1 1）鳥槍法：）鳥槍法：供體細(xì)胞中的供體細(xì)胞中的DNADNA許多許多DNADNA片段片段運(yùn)載體運(yùn)載體限制酶限制酶與載體連接與載體連接受體細(xì)胞受體細(xì)胞產(chǎn)生特定性狀產(chǎn)生特定性狀導(dǎo)入導(dǎo)入外源外源DNADNA擴(kuò)增擴(kuò)增目的基因目的基因分離分離(直接分離法直接分離法)以目的基因轉(zhuǎn)錄成的以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使信使RNA為模板，為模板，再再反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄酶的催化下反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈的催化下反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈

8、DNA，然后在，然后在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，即，即cDNA，從而獲得所需的基因。，從而獲得所需的基因。（2 2）反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法（cDNAcDNA文庫的構(gòu)建方法文庫的構(gòu)建方法）上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？上述三種目的基因提取的方法有何優(yōu)缺點(diǎn)？優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)鳥槍法鳥槍法反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法根據(jù)已知氨基根據(jù)已知氨基酸合成酸合成DNADNA法法操作簡便操作簡便廣泛使用廣泛使用工作量大，盲目，工作量大，盲目，分離出來的有時并分離出來的有時并非一個基因非一個基因?qū)Ｒ恍詮?qiáng)專一性強(qiáng)操作過程麻煩，操作過程麻煩，mRNAmRNA很不穩(wěn)定，要很不穩(wěn)定，要求的技術(shù)條件較高

9、求的技術(shù)條件較高專一性最強(qiáng)專一性最強(qiáng)僅限于合成核苷酸僅限于合成核苷酸對較少的簡單基因?qū)^少的簡單基因依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列；如：根據(jù)基因的核苷酸序列；基因的功能；基因的功能；基因在染色體上的位置；基因在染色體上的位置；基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA；基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性?；蚍g產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。u基因文庫基因文庫中不是直接保管相應(yīng)基因，中不是直接保管相應(yīng)基因，而是而是保存受體菌保存受體菌，菌中含基因。，菌中含基因。1234522557294時間（min）溫度（）PCR反應(yīng)PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點(diǎn)適溫延伸3高溫變性1低

10、溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴(kuò)增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍模板DNA95PCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)50引物1引物2DNA引物PCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)72第1輪結(jié)束第2輪開始PCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)955072TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)72第2輪結(jié)束 概念：概念：PCRP

11、CR全稱為全稱為_，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)。的核酸合成技術(shù)。前提條件：前提條件：_；原料：原料：_、_ _、_、_。原理：原理：_方式：以方式：以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸DNADNA引物引物熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶指數(shù)指數(shù)2 2n n使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增模板模板DNADNAn 過程

12、：過程：變性、退火、延伸三步曲變性、退火、延伸三步曲變性：變性：加熱至加熱至90909595雙鏈雙鏈DNADNA解鏈成解鏈成為單鏈為單鏈DNADNA退火：退火：冷卻至冷卻至55556060部分引物與模部分引物與模板的單鏈板的單鏈DNADNA的特定的特定互補(bǔ)部位相配對和互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合結(jié)合延伸：延伸：加熱至加熱至70707575以目的基因?yàn)橐阅康幕驗(yàn)槟０澹铣苫パa(bǔ)的模板，合成互補(bǔ)的新新DNADNA鏈鏈變性變性退火退火延伸延伸過程：過程：a a、DNADNA變性（變性（90-9590-95）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火（退火

13、（復(fù)性復(fù)性55-6555-65）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與物與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。c c、延伸（延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，從酶的作用下，從 引物的引物的55端端33端延伸，合成與模板互補(bǔ)端延伸，合成與模板互補(bǔ) 的的_。氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈思考？思考？1 1個個DNADNA分子進(jìn)行分子進(jìn)行PCRPCR擴(kuò)增擴(kuò)增,循環(huán)循環(huán)4 4次，次，理論上至少需要幾個引物？理論上至少需要幾個引物？2（2n-1）(n為循環(huán)次數(shù)為循環(huán)次數(shù))（24-1）2=30n模板模板DNAn 特異性引物特異性引物n

14、耐熱耐熱DNA聚合酶聚合酶n dNTPsn Mg2+PCRPCR體系基本組成成分體系基本組成成分一對寡核苷酸序列：與目的基因一對寡核苷酸序列：與目的基因的起始段互補(bǔ)的起始段互補(bǔ)PCRPCR總結(jié)總結(jié)：PCR的基本反應(yīng)步驟的基本反應(yīng)步驟變性變性90-95C延伸延伸70-75C退火退火55-60CPCRPCR總結(jié)總結(jié)：()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 20PCR技術(shù)擴(kuò)增與技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較復(fù)制的比較PCRPCR技術(shù)技術(shù)DNADNA復(fù)制復(fù)制相相同同點(diǎn)點(diǎn)原理原理原料原料條件條件不不同同點(diǎn)點(diǎn)解旋解旋方式方式場所場所酶酶結(jié)果結(jié)果堿基互補(bǔ)配對堿基互補(bǔ)配對四種脫氧核

15、苷酸四種脫氧核苷酸模板、能量、酶模板、能量、酶DNADNA在高溫下在高溫下變性解旋變性解旋解旋酶催化解旋酶催化體外復(fù)制體外復(fù)制細(xì)胞核內(nèi)細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的DNADNA聚合酶聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的DNADNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNADNA片段片段形成整個形成整個DNADNA分子分子PCR的基本原理nPCR反應(yīng)條件nPCR過程nPCR的特點(diǎn)重復(fù)30輪后230=1,073,741,824模板DNA第1輪擴(kuò)增第2輪擴(kuò)增第3輪擴(kuò)增第4輪擴(kuò)增第5輪擴(kuò)增第6輪擴(kuò)增理想拷貝數(shù)=2n n 循環(huán)次數(shù)實(shí)際拷貝數(shù)=(1+x)n X 平均效率,約為0.85 n 循環(huán)次數(shù) 根據(jù)已知蛋白質(zhì)根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸

16、序列，推測的氨基酸序列，推測出相應(yīng)的出相應(yīng)的mRNAmRNA序列，序列，然后按照堿基互補(bǔ)配然后按照堿基互補(bǔ)配對原則，推測出它的對原則，推測出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合以單核苷酸為原料合成目的基因成目的基因。蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNAmRNA的核苷酸序列的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列推測推測推測推測目的基因目的基因化學(xué)合成化學(xué)合成（三）化學(xué)方法人工合成目的基因（三）化學(xué)方法人工合成目的基因q從基因文庫中獲取從基因文庫中獲取q利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增q利用化學(xué)方法人工合成利用

17、化學(xué)方法人工合成歸納：獲取目的基因的方法歸納：獲取目的基因的方法 用一定的用一定的_切割切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出口，露出_。用用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，處，再加入適量再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶相同的黏性末端相同的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶1.1.過程過程:二、二、構(gòu)建構(gòu)建表達(dá)表達(dá)載體載體 核心核心質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理

18、限制酶處理一個切口一個切口兩個黏性末端兩個黏性末端兩個切口兩個切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種過程過程:2.2.基因表達(dá)載體的目的基因表達(dá)載體的目的（1 1）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在）使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并可以遺傳給下一代；并可以遺傳給下一代；（2 2）使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。）使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?？茖W(xué)家在培育抗蟲棉時，經(jīng)歷了多次失敗，科學(xué)家在培育抗蟲棉時，經(jīng)歷了多次失敗，才獲得成功。才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因抗蟲基因插入載插入載體質(zhì)粒中，然

19、后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動子啟動子(抗蟲基因首端抗蟲基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉，導(dǎo)入棉花受精卵，長成的棉花植株還是沒有抗蟲能力。科學(xué)家又在有啟動花植株還是沒有抗蟲能力。科學(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子終止子(抗蟲基因末抗蟲基因末端端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長的植株，有了抗蟲能力?？瓜x能力。作為基因工程表達(dá)載體，作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可

20、以完成任務(wù)只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？（嗎？為什么？（P P1515）不可以。不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的必須構(gòu)建上述元件的是：是：（1 1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自受體生物自身基因身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)；的啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)；（2 2）通過通過cDNAcDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只文庫獲得的目的基因沒有啟動子，

21、只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（3 3）目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（4 4）為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子（增強(qiáng)基因啟動子工作效率增強(qiáng)基因啟動子工作效率的順式作用序列，能夠在相對于啟動子的任何方向和任的順式作用序列，能夠在相對于啟動子的任何方向和任何位置何位置(上游或下游上游或下游)上都發(fā)揮作用。上都發(fā)揮作用。）等；等；（5 5）有時需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的有時需要確定目的基因表達(dá)的

22、產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等?；虻?。3.3.基因表達(dá)載體的基因表達(dá)載體的組成：組成：它們有什么作用？它們有什么作用？a、目的基因、目的基因b、啟動子、啟動子c、終止子、終止子d、標(biāo)記基因、標(biāo)記基因調(diào)節(jié)基調(diào)節(jié)基 因因操縱基操縱基 因因結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因RNA聚合酶聚合酶半乳糖苷酶半乳糖苷酶 酶酶 酶酶 RNA聚合酶聚合酶啟動子啟動子RNA聚合酶聚合酶啟動子啟動子：位于基因首端的一段特殊的位于基因首端的一段特殊的D

23、NA片斷，片斷，它是它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能聚合酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得蛋白質(zhì)。，最終獲得蛋白質(zhì)。思考思考1：表達(dá)載體為什么一定要有啟動子？表達(dá)載體為什么一定要有啟動子？n（1 1）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使）生物之間進(jìn)行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動子才能有用受體生物自身基因的啟動子才能有利于基因的表達(dá)；利于基因的表達(dá)；n（2 2）通過）通過cDNAcDNA文庫獲得的目的基因沒文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體細(xì)有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體細(xì)胞無法轉(zhuǎn)錄。胞無法轉(zhuǎn)錄。思考思考2：終止子的作用是

24、什么？終止子的作用是什么？終止子是位于基因尾端的一段特殊終止子是位于基因尾端的一段特殊的的DNA片斷，能終止片斷，能終止mRNA的轉(zhuǎn)錄。的轉(zhuǎn)錄。是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選的基因，從而將有目的基因的細(xì)胞篩選出來。出來。思考思考3：標(biāo)記基因有什么作用？標(biāo)記基因有什么作用？載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu)。增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu)。注意注意

25、用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又用既用到限制酶切割載體，又用到到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵。的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵。啟動子、終止子啟動子、終止子對于目的基因表達(dá)必不可少。對于目的基因表達(dá)必不可少。目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，必需以表達(dá)必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。載體的方式攜帶進(jìn)去?；蛞蚬すこ坛碳技夹g(shù)術(shù)路路線線三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞借鑒借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。的途徑。（一）轉(zhuǎn)化：（一）轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入

26、目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)（二）（二）方法方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱游锛?xì)胞動物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞1.1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞n農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法n基因槍法基因槍法n花粉管通道法花粉管通道法（1 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法特點(diǎn)：特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸易感染雙子葉植物和裸子植物，對大多

27、數(shù)單子葉植子植物，對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力物沒有感染能力原理：原理：TiTi質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的T-DNAT-DNA可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的并整合到受體細(xì)胞染色體的DNADNA上。上。轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程:TiTi質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因構(gòu)建構(gòu)建表表達(dá)達(dá)載載體體導(dǎo)入導(dǎo)入植植物物細(xì)細(xì)胞胞插入插入植物細(xì)胞植物細(xì)胞染色染色DNADNA表達(dá)表達(dá)新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌 基因槍法又稱微基因槍法又稱微彈轟擊法，是彈轟擊法，是利用壓利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力縮氣體產(chǎn)生的動力，將包裹在金屬顆粒表將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體面的表達(dá)載體DNADNA打打入受體細(xì)胞中入受

28、體細(xì)胞中，使目，使目的基因與其整合并表的基因與其整合并表達(dá)的方法。達(dá)的方法。（2 2）基因槍法）基因槍法（3 3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱頭植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊。穿過花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，前，剪去柱頭，然后，滴加滴加DNADNA（含目的基含目的基因），使目的基因借因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。體細(xì)胞。胚珠花藥花絲柱頭花柱子房壁子房雄蕊雌蕊2.2.將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞將目的基因?qū)雱游锛?xì)

29、胞（1 1）方法：顯微注射法）方法：顯微注射法（將基因表達(dá)載體提（將基因表達(dá)載體提純，用顯微儀注射到純，用顯微儀注射到受精卵受精卵中）中）（2 2）操作程序）操作程序:提純含目的基因表達(dá)載體提純含目的基因表達(dá)載體取受精卵取受精卵顯微注射顯微注射移植到子宮移植到子宮受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動物新性狀動物常用法常用法：CaCa2+2+處理處理常用菌常用菌：大腸桿菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少過程：過程：CaCa2+2+處理大處理大腸桿菌腸桿菌感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)

30、胞混合感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞吸細(xì)胞吸收收DNADNA3.3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞思考：為什么要用思考：為什么要用Ca2+處理受體細(xì)胞？處理受體細(xì)胞？用用CaCa2 2處理，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性處理，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性受體生物受體生物 植物植物 動物動物 微生物微生物受體細(xì)胞受體細(xì)胞導(dǎo)入方法導(dǎo)入方法受精卵受精卵體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵受精卵細(xì)胞細(xì)胞/個體個體農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注顯微注射技術(shù)射技術(shù)用用CaCa2+2+處理成處理成感受態(tài)細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞采用基因工程的方法培育抗蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的作法正確采用基因工程的方法培育抗

31、蟲棉，下列導(dǎo)入目的基因的作法正確的是（）的是（）A.A.將毒素蛋白注射到受精卵中將毒素蛋白注射到受精卵中B.B.將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNADNA序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌，用該細(xì)序列，與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌，用該細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)C.C.將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNADNA序列，與質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并序列，與質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵進(jìn)入受精卵D.D.將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNADNA序列，注射到棉受精卵中序列，注射到棉受精卵中四、目的基因的檢測與鑒定四、目的基因的檢測與鑒定n檢測檢測:q是否插入目的基

32、因是否插入目的基因q是否轉(zhuǎn)錄是否轉(zhuǎn)錄q是否翻譯是否翻譯n鑒定鑒定:q分子水平分子水平鑒定鑒定q個體生物學(xué)水平個體生物學(xué)水平鑒定鑒定1 1、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因 首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNADNA；（1 1）方法方法:DNADNA分子雜交分子雜交（2 2）過程）過程:將含目的基因的將含目的基因的DNADNA片段用放射性同位素等片段用放射性同位素等作標(biāo)記作標(biāo)記,以此做以此做探針探針；使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯示若顯示出雜交帶出雜交帶,表明染色體已插入染

33、色體表明染色體已插入染色體DNADNA中。中。（一）檢測（一）檢測：采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補(bǔ)的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合的堿基序列，那么，互補(bǔ)的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補(bǔ)堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。（二）鑒定（個體生物學(xué)水平）（二）鑒定（個體生物學(xué)水平）抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法:分分 子子 雜雜 交交

34、方法方法:抗原抗原-抗體雜交抗體雜交過程過程:用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mRNAmRNA雜交雜交,若出現(xiàn)雜交帶若出現(xiàn)雜交帶,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA。提取提取蘇云金桿菌蘇云金桿菌Bt毒素蛋白毒素蛋白將將Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠體內(nèi)射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出從小鼠血管抽出血液分離出抗血液分離出抗Bt毒素的抗體毒素的抗體抗體抗體蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 出現(xiàn)出現(xiàn)雜交帶雜交帶脫分化脫分化組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)怎樣檢驗(yàn)抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？怎樣檢驗(yàn)抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？沒有抗蟲基因沒有抗蟲基因的棉植株的棉植株有抗蟲基因的有抗蟲基因的棉植株棉植株棉鈴蟲

35、棉鈴蟲蟲沒有死蟲沒有死蟲被殺死蟲被殺死沒有表達(dá)沒有表達(dá)目的基目的基因表達(dá)因表達(dá)類類型型步驟步驟 檢測內(nèi)容檢測內(nèi)容方法方法結(jié)果顯示結(jié)果顯示分分子子檢檢測測第一第一步步目的基因是否進(jìn)目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞入受體細(xì)胞DNADNA分子雜交分子雜交（DNADNA和和DNADNA之間）之間）是否成功顯示是否成功顯示出雜交帶出雜交帶第二第二步步目的基因是否轉(zhuǎn)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出錄出mRNAmRNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)（DNADNA和和mRNAmRNA之間）之間）是否成功顯示是否成功顯示出雜交帶出雜交帶第三第三步步目的基因是否翻目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)譯出蛋白質(zhì)抗原抗原抗體雜交抗體雜交是否成功顯示是否成功

36、顯示出雜交帶出雜交帶個個體體水水平平鑒鑒定定 包括抗蟲、抗病的包括抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及，以確定是否有抗性以及抗性的程度；抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定功能是否相同等。否相同等。提示：提示：DNADNA分子雜交技術(shù)首先提取受體分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的細(xì)胞中的DNADNA，然后高溫解成單鏈，再，然后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的與同位素標(biāo)記的DNADNA探針雜交；探針雜交；抗原抗體雜交所用到的抗體是抗原抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)

37、生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。歸納歸納:基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.獲取目的基因獲取目的基因u從基因文庫從基因文庫u利用利用PCRu化學(xué)方法人工合成化學(xué)方法人工合成2.構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體u目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因3.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞u轉(zhuǎn)化法（微生物）、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（植物）、顯微注射法轉(zhuǎn)化法（微生物）、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（植物）、顯微注射法（動物）（動物）4.目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定u檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯為什么要構(gòu)建基

38、因文庫？直接從含有目的基因的為什么要構(gòu)建基因文庫？直接從含有目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？生物體內(nèi)提取不行嗎？構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可唯一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過以通過PCRPCR方式從含有該基因的生物的方式從含有該基因的生物的DNADNA中，直接獲中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCRPCR方式從方式從mRNAmRNA中獲得，中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只但如果所需要的目

39、的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序

40、的有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？用大腸桿菌嗎？有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。尋根問底：尋根問底：根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的

41、機(jī)根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理理,你能分析出你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因農(nóng)桿菌不能將目的基因不能導(dǎo)入單不能導(dǎo)入單子葉植物的原因嗎子葉植物的原因嗎?若將一個抗病基因?qū)胄←溨腥魧⒁粋€抗病基因?qū)胄←溨?理論上講你應(yīng)該怎樣做理論上講你應(yīng)該怎樣做?要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；菌菌株都可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，目的是使農(nóng)桿菌向植物要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的誘組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的誘導(dǎo)的基因，使導(dǎo)的基因，使T-D

42、NAT-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNADNA上。上。酚類誘導(dǎo)物主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合酚類誘導(dǎo)物主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中成，通常不存在于單子葉植物中 4.-4.-珠蛋白是動物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異珠蛋白是動物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的-珠蛋白，珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)？（1 1）從小鼠中克隆出）從小鼠中克隆

43、出-珠蛋白基因的編碼序列（珠蛋白基因的編碼序列（cDNAcDNA)。（2 2）將）將cDNAcDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達(dá)載體。加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達(dá)載體。（3 3）將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在）將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá)載體未進(jìn)入含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果大腸桿菌中，大腸桿菌會不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則

44、表明培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明-珠蛋白基因已進(jìn)入珠蛋白基因已進(jìn)入其中。其中。（4 4）培養(yǎng)進(jìn)入了）培養(yǎng)進(jìn)入了-珠蛋白基因的大腸桿菌，收集菌體，破珠蛋白基因的大腸桿菌，收集菌體，破碎后從中提取碎后從中提取-珠蛋白。珠蛋白。DNA附著在膜上附著在膜上硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜加探針加探針報(bào)告基因（含熒光素分子）報(bào)告基因（含熒光素分子）變性變性DNA分子雜交分子雜交（如檢測（如檢測SARS病毒等）病毒等）abcd檢測是否插入目的基因，檢測是否插入目的基因，利用利用DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)，目的，目的基因基因DNADNA一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取的一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取

45、的DNADNA雜交，雜交，看是否有雜交帶?？词欠裼须s交帶。檢測是否轉(zhuǎn)錄出了檢測是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA，利用利用分子雜交技術(shù)，分子雜交技術(shù)，目的基因目的基因DNADNA一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取的一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取的mRNAmRNA雜交，看雜交，看是否有雜交帶。是否有雜交帶。檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)?？贵w與蛋白質(zhì)進(jìn)行抗抗體與蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原抗體雜交，看是否有雜交帶。原抗體雜交，看是否有雜交帶。還可以進(jìn)行個體水平的鑒定，根據(jù)其性狀。還可以進(jìn)行個體水平的鑒定，根據(jù)其性狀。提示：提示：DNADNA分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的DNADNA，然，然后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的DNADNA探針雜交；探針雜交；抗原抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)抗原抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來的。三種印跡技術(shù)的比較三種印跡技術(shù)的比較分子雜交實(shí)驗(yàn)分子雜交實(shí)驗(yàn)放放射射自自顯顯影影照照片片DNA鏈末端合成終止法鏈末端合成終止法